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关于多肽,你需要提前 get 这些
706 人阅读发布时间:2020-12-11 12:59
对于涉及多肽的一些实验中,如何设计多肽序列,多肽纯度怎样选择,拿到多肽该如何溶解、保存等一系列情况随之而来,下面的内容或许能给您提供些帮助。
总体而言:如果是出自蛋白C端的序列,通过乙酰化将N端屏蔽;如果是出自蛋白N端的序列,通过酰胺化将C端屏蔽;如果是出自蛋白中间部分,用乙酰化和酰胺化将两端都屏蔽。
纯度通常是由HPLC决定的。纯度定义是多肽样品中含正确序列的组分的百分比,而肽的净含量是指样品中肽类物质相对于非肽类物质所占的百分比,肽的净含量通常是用氨基酸组分分析或紫外分光法测定的。这个信息主要是在一些对肽的浓度很敏感的实验中,对计算肽的浓度是很重要的。
首先试蒸馏水和超声。如果不溶,计算肽中的碱性残基(Lys,Arg,His和自由氨基端)和酸性残基(Glu,Asp和自由羧基端)的数目,如果碱性基团偏多,可以滴加1N的醋酸,直到溶解为止;如果酸性基团偏多,可以滴加1N的氨水NH3 •H2O,直到溶解为止。
如果在实验中需要用缓冲液,建议在多肽完全溶解之前不要加入盐,因为盐会使肽的溶解度降低。
如果上述溶液中肽都不溶,可以试试用少量有机溶剂如DMSO、乙腈、DMF或尿素。
多肽在溶液中的稳定性要差一些,所以强烈建议使用灭菌水或灭菌过滤的方式进行溶解,如果序列中有Cys,Met或Trp等残基,用无氧的溶剂进行溶解以避免氧化。使用冷冻的溶液时,建议将溶液进行分装,以避免多次的溶解和冷冻对多肽造成的损害。使用前应保证包装容器和所装物品回温到室温,以避免吸水。多肽溶液最好即配即用,使用过程中将肽溶液保持在低温但不结冻的状态下。
长期保存(3个月到5年):冻干粉,在-20℃下冷冻干燥保存;
中期保存(0-3个月): -20℃冷冻液体或冻干粉冷藏;
短期保存(<1周):冷藏的液体或冻干粉。
- 如何设计多肽的序列?
总体而言:如果是出自蛋白C端的序列,通过乙酰化将N端屏蔽;如果是出自蛋白N端的序列,通过酰胺化将C端屏蔽;如果是出自蛋白中间部分,用乙酰化和酰胺化将两端都屏蔽。
- 怎样选择肽纯度?
- 多肽的纯度解释
- 多肽的净含量为何物?
纯度通常是由HPLC决定的。纯度定义是多肽样品中含正确序列的组分的百分比,而肽的净含量是指样品中肽类物质相对于非肽类物质所占的百分比,肽的净含量通常是用氨基酸组分分析或紫外分光法测定的。这个信息主要是在一些对肽的浓度很敏感的实验中,对计算肽的浓度是很重要的。
- 如何溶解多肽?
首先试蒸馏水和超声。如果不溶,计算肽中的碱性残基(Lys,Arg,His和自由氨基端)和酸性残基(Glu,Asp和自由羧基端)的数目,如果碱性基团偏多,可以滴加1N的醋酸,直到溶解为止;如果酸性基团偏多,可以滴加1N的氨水NH3 •H2O,直到溶解为止。
如果在实验中需要用缓冲液,建议在多肽完全溶解之前不要加入盐,因为盐会使肽的溶解度降低。
如果上述溶液中肽都不溶,可以试试用少量有机溶剂如DMSO、乙腈、DMF或尿素。
- 多肽的保存说明
多肽在溶液中的稳定性要差一些,所以强烈建议使用灭菌水或灭菌过滤的方式进行溶解,如果序列中有Cys,Met或Trp等残基,用无氧的溶剂进行溶解以避免氧化。使用冷冻的溶液时,建议将溶液进行分装,以避免多次的溶解和冷冻对多肽造成的损害。使用前应保证包装容器和所装物品回温到室温,以避免吸水。多肽溶液最好即配即用,使用过程中将肽溶液保持在低温但不结冻的状态下。
长期保存(3个月到5年):冻干粉,在-20℃下冷冻干燥保存;
中期保存(0-3个月): -20℃冷冻液体或冻干粉冷藏;
短期保存(<1周):冷藏的液体或冻干粉。