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作为多肽使用者，您该了解的多肽纯度
人阅读 发布时间：2019-04-26 15:09
纯度是一个相对概念，没有绝对的纯度，产品的纯度与其检测手段关系密切。而多肽的纯度通常是指利用反相高效液相色谱（RP-HPLC）检测出的纯度，即在一定波长的紫外光检测器下目标多肽峰面积占总峰面积的百分含量，其数值与仪器状态以及实验条件密切相关，下面对几个主要参数进行介绍。
检测波长（Wavelength）：多肽中的肽键即酰胺键，通常在 220 nm 处有较强吸收（与蛋白质类似），所以一般选用 220 nm 作为多肽的检测波长；某些多肽中含有苯环结构如 Trp、Tyr 或染料分子等，也可采用 275 nm 作为检测波长进行检测以作参考。
色谱柱类型（Column）：色谱柱是高效液相色谱中最关键的部件，其塔板数直接决定了杂质分子在仪器中的分离度。在多肽的 HPLC 分析检测中常用色谱柱的参数为：C18（反相材料）, 4.6 mm（色谱柱内径）× 250 mm（色谱柱长度），5 μm（硅胶粒径），100 Å（硅胶孔径）。这类色谱柱的柱效至少在 10000 以上，低柱效的色谱柱分离度较低，从而使纯度结果偏高。
梯度（Gradient）：多肽检测中常用梯度洗脱，即洗脱剂中有机相（主要指乙|腈）比例随时间逐步增高。有机相的增加速率对纯度结果有重大影响，增加速率过快会导致杂质与主产物来不及分离而堆积到一起，不能产生有效分离，得出的纯度数据「水分」过大。通常采用的是每分钟增加一个梯度的洗脱方式（乙|腈浓度每分钟增加 1%, v/v）。进一步降低梯度的增加速率对普通多肽样品意义不大，且会增加每个样品的检测时长，故而一般不采用。
溶剂（Solvents）：溶剂选择不当也可能影响纯度检测的结果，主要需注意以下几点：确保多肽样品完全溶解，得到澄清溶液；尽量避免使用 DMF/DMSO/AcOH 等在 220 nm 处具有紫外吸收的溶剂；多肽序列中含有不稳定的氨基酸残基或修饰时配备的多肽溶液要尽快使用等。
在以上几个参数（我们称其为多肽检测的 WCGS 标准）都能确定的情况下，绝大多数多肽的 HPLC 纯度也就相应地确定下来，只有这样的纯度信息应用到实验结果的分析时才更有实际意义。
北京中科亚光生物科技有限公司十多年来在多肽产品的质控中均采用此 WCGS 标准，为客户提供大量的高质量多肽，赢得了良好的业界口碑。如您有多肽定制服务及多肽修饰方面的需求，欢迎来电来函咨询，我们将以最大的热忱为您服务！
地址：北京市丰台区科学城海鹰路 7 号大恒科技大厦四层 邮编：100070
电话：010-62810190/85 传真：010-62818544 QQ:564774988/2101981825
E-mail: marketing@scilight-peptide.com
Web: www.scilight-peptide.com
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色谱柱类型（Column）：色谱柱是高效液相色谱中最关键的部件，其塔板数直接决定了杂质分子在仪器中的分离度。在多肽的 HPLC 分析检测中常用色谱柱的参数为：C18（反相材料）, 4.6 mm（色谱柱内径）× 250 mm（色谱柱长度），5 μm（硅胶粒径），100 Å（硅胶孔径）。这类色谱柱的柱效至少在 10000 以上，低柱效的色谱柱分离度较低，从而使纯度结果偏高。
梯度（Gradient）：多肽检测中常用梯度洗脱，即洗脱剂中有机相（主要指乙|腈）比例随时间逐步增高。有机相的增加速率对纯度结果有重大影响，增加速率过快会导致杂质与主产物来不及分离而堆积到一起，不能产生有效分离，得出的纯度数据「水分」过大。通常采用的是每分钟增加一个梯度的洗脱方式（乙|腈浓度每分钟增加 1%, v/v）。进一步降低梯度的增加速率对普通多肽样品意义不大，且会增加每个样品的检测时长，故而一般不采用。
溶剂（Solvents）：溶剂选择不当也可能影响纯度检测的结果，主要需注意以下几点：确保多肽样品完全溶解，得到澄清溶液；尽量避免使用 DMF/DMSO/AcOH 等在 220 nm 处具有紫外吸收的溶剂；多肽序列中含有不稳定的氨基酸残基或修饰时配备的多肽溶液要尽快使用等。
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