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关于多肽，你需要提前 get 这些
人阅读 发布时间：2020-12-10 17:27
对于涉及多肽的一些实验中，如何设计多肽序列，多肽纯度怎样选择，拿到多肽该如何溶解、保存等一系列情况随之而来，下面的内容或许能给您提供些帮助。
如何设计多肽的序列？
多肽是用来模拟蛋白的，为了模仿蛋白的表现，我们需要合成与蛋白有相似结构和电荷的多肽。当一条肽段从一个蛋白中「切出」之后，两端的电荷数将与基因体蛋白有差异。我们需要改变合成策略来使他们一致。
总体而言：如果是出自蛋白 C 端的序列，通过乙酰化将 N 端屏蔽；如果是出自蛋白 N 端的序列，通过酰胺化将 C 端屏蔽；如果是出自蛋白中间部分，用乙酰化和酰胺化将两端都屏蔽。
怎样选择肽纯度？
肽的纯度是很重要的指标，纯度的选择取决于实验的目的。对于不太灵敏的筛选实验，建议使用粗品或 >75%；对免疫级别，建议选用 >85%；对于受体与 LIGAND 相互作用的研究，生物 ASSAY 研究，或细胞水平的研究，建议 >95%；对于结构研究，建议 >98%。
多肽的纯度解释
多肽的纯度通常是通过 HPLC，用每分钟 1% 的标准乙腈梯度来检测决定的。合成过程中，氨基酸之间的交联效率不是总能达到 100%，因而产生一系列的氨基酸缺失的杂质。大多说这样的氨基酸缺失的杂质在纯化过程中都被去掉了，但有少数的杂质其色谱表现与目标多肽很相近。这些氨基酸缺失的杂质肽留在了多肽样品中就构成了余下的几个百分点。
多肽的净含量为何物？
干品多肽的重量中不仅仅包含多肽，还包含有一些非肽的组分：如水，被吸收的溶剂、配位离子和盐等。肽的净含量是指肽在其中的重量百分比，这个百分比的数值范围很大，取决于纯度、序列以及合成和纯化的方法，不要将肽的净含量和纯度混为一谈，它们是完全不同的两个概念。
纯度通常是由 HPLC 决定的。纯度定义是多肽样品中含正确序列的组分的百分比，而肽的净含量是指样品中肽类物质相对于非肽类物质所占的百分比，肽的净含量通常是用氨基酸组分分析或紫外分光法测定的。这个信息主要是在一些对肽的浓度很敏感的实验中，对计算肽的浓度是很重要的。
如何溶解多肽？
多肽的溶解与多肽的序列、冻干状态等相关，建议先用少量肽来试验最适溶解方法。
首先试蒸馏水和超声。如果不溶，计算肽中的碱性残基（Lys，Arg，His 和自由氨基端）和酸性残基（Glu，Asp 和自由羧基端）的数目，如果碱性基团偏多，可以滴加 1N 的醋酸，直到溶解为止；如果酸性基团偏多，可以滴加 1N 的 NH3·H2O，直到溶解为止。
如果在实验中需要用缓冲液，建议在多肽完全溶解之前不要加入盐，因为盐会使肽的溶解度降低。
如果上述溶液中肽都不溶，可以试试用少量有机溶剂如 DMSO、乙腈、DMF 或尿素。
多肽的保存说明
在可能的情况下，应该尽量将多肽以冻干粉的形式在 -20℃ 下保存，以避免细菌的降解、二级结构的形成、氧化或其他修饰的发生。
多肽在溶液中的稳定性要差一些，所以强烈建议使用灭菌水或灭菌过滤的方式进行溶解，如果序列中有 Cys，Met 或 Trp 等残基，用无氧的溶剂进行溶解以避免氧化。使用冷冻的溶液时，建议将溶液进行分装，以避免多次的溶解和冷冻对多肽造成的损害。使用前应保证包装容器和所装物品回温到室温，以避免吸水。多肽溶液最好即配即用，使用过程中将肽溶液保持在低温但不结冻的状态下。
长期保存（3 个月到 5 年）：冻干粉，在 -20℃ 下冷冻干燥保存；
中期保存（0-3 个月）：-20℃ 冷冻液体或冻干粉冷藏；
短期保存（<1 周）：冷藏的液体或冻干粉。
如何设计多肽的序列？
多肽是用来模拟蛋白的，为了模仿蛋白的表现，我们需要合成与蛋白有相似结构和电荷的多肽。当一条肽段从一个蛋白中「切出」之后，两端的电荷数将与基因体蛋白有差异。我们需要改变合成策略来使他们一致。
总体而言：如果是出自蛋白 C 端的序列，通过乙酰化将 N 端屏蔽；如果是出自蛋白 N 端的序列，通过酰胺化将 C 端屏蔽；如果是出自蛋白中间部分，用乙酰化和酰胺化将两端都屏蔽。
怎样选择肽纯度？
肽的纯度是很重要的指标，纯度的选择取决于实验的目的。对于不太灵敏的筛选实验，建议使用粗品或 >75%；对免疫级别，建议选用 >85%；对于受体与 LIGAND 相互作用的研究，生物 ASSAY 研究，或细胞水平的研究，建议 >95%；对于结构研究，建议 >98%。
多肽的纯度解释
多肽的纯度通常是通过 HPLC，用每分钟 1% 的标准乙腈梯度来检测决定的。合成过程中，氨基酸之间的交联效率不是总能达到 100%，因而产生一系列的氨基酸缺失的杂质。大多说这样的氨基酸缺失的杂质在纯化过程中都被去掉了，但有少数的杂质其色谱表现与目标多肽很相近。这些氨基酸缺失的杂质肽留在了多肽样品中就构成了余下的几个百分点。
多肽的净含量为何物？
干品多肽的重量中不仅仅包含多肽，还包含有一些非肽的组分：如水，被吸收的溶剂、配位离子和盐等。肽的净含量是指肽在其中的重量百分比，这个百分比的数值范围很大，取决于纯度、序列以及合成和纯化的方法，不要将肽的净含量和纯度混为一谈，它们是完全不同的两个概念。
纯度通常是由 HPLC 决定的。纯度定义是多肽样品中含正确序列的组分的百分比，而肽的净含量是指样品中肽类物质相对于非肽类物质所占的百分比，肽的净含量通常是用氨基酸组分分析或紫外分光法测定的。这个信息主要是在一些对肽的浓度很敏感的实验中，对计算肽的浓度是很重要的。
如何溶解多肽？
多肽的溶解与多肽的序列、冻干状态等相关，建议先用少量肽来试验最适溶解方法。
首先试蒸馏水和超声。如果不溶，计算肽中的碱性残基（Lys，Arg，His 和自由氨基端）和酸性残基（Glu，Asp 和自由羧基端）的数目，如果碱性基团偏多，可以滴加 1N 的醋酸，直到溶解为止；如果酸性基团偏多，可以滴加 1N 的 NH3·H2O，直到溶解为止。
如果在实验中需要用缓冲液，建议在多肽完全溶解之前不要加入盐，因为盐会使肽的溶解度降低。
如果上述溶液中肽都不溶，可以试试用少量有机溶剂如 DMSO、乙腈、DMF 或尿素。
多肽的保存说明
在可能的情况下，应该尽量将多肽以冻干粉的形式在 -20℃ 下保存，以避免细菌的降解、二级结构的形成、氧化或其他修饰的发生。
多肽在溶液中的稳定性要差一些，所以强烈建议使用灭菌水或灭菌过滤的方式进行溶解，如果序列中有 Cys，Met 或 Trp 等残基，用无氧的溶剂进行溶解以避免氧化。使用冷冻的溶液时，建议将溶液进行分装，以避免多次的溶解和冷冻对多肽造成的损害。使用前应保证包装容器和所装物品回温到室温，以避免吸水。多肽溶液最好即配即用，使用过程中将肽溶液保持在低温但不结冻的状态下。
长期保存（3 个月到 5 年）：冻干粉，在 -20℃ 下冷冻干燥保存；
中期保存（0-3 个月）：-20℃ 冷冻液体或冻干粉冷藏；
短期保存（<1 周）：冷藏的液体或冻干粉。
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